جداسازی سلول‌های بنیادی مزانشیمی CD34+ از مغز استخوان موش

  چکید ه   سابقه و هدف   جداسازی و تخلیص سلول‌های بنیادی مزانشیمی( MSCs ) موش از طریق روش چسبیدن به ظرف کشت پلاستیک، به علت رشد ناخواسته سلول‌های خونی و غیر مزانشیمی بسیار مشکل است. در این مطالعه، جمعیت هموژن از سلول‌های بنیادی مزانشیمی CD34+ با روش انتخاب ایمنی مثبت( Positive immunoselection ) از مغز استخوان موش جداسازی شده است.   مواد وروش‌ها   مطالعه انجام شده از نوع تجربی بود. پس از نخاعی کردن موش‌های نژاد C57B1/6 ، سلول‌های مغز استخوان آن‌ها آسپیره و با دانه‌های آهن‌ربایی متصل به آنتی‌بادی ضد CD34 انکوبه گردید. بعد از انتخاب ایمنی مثبت، بخشی از سلول‌ها برای بررسی درصد بیان مارکر CD34 با دستگاه فلوسایتومتری مورد بررسی قرار گرفتند و مابقی کشت گردیدند. 24 ساعت پس از کشت، سلول‌های غیر چسبان که عمدتاًَ سلول‌های بنیادی خون‌ساز بودند، از طریق شستشو حذف شدند و سلول‌های چسبیده به ظرف کشت پلاستیک از نظر وجود مارکرهای سطحی( CD11b and CD45 ، CD34 ، Vcam-1 ، Sca-1 ، CD44 ) مورد بررسی قرار گرفتند. به منظور اثبات ماهیت مزانشیمی، از آزمایش تمایز به استخوان و چربی استفاده شد.   یافته‌ها   یک هفته پس از کشت اولیه، جمعیت خالصی از سلول‌های CD34+ شبه ‌فیبروبلاست به دست آمد. در این سلول‌ها مارکرهای CD34 ، Sca-1 ، CD44 و Vcam-1 بیان شد اما CD11b و CD45 بیان نشد. در این سلول‌ها ژن‌های تمایز به استخوان(استئوکالسین، استئوپنتین و گیرنده هورمون پاراتیروئید) و چربی(لیپوپروتئین لیپاز و آدیپسین) بیان شدند.   نتیجه گیری   از این مطالعه می‌توان نتیجه گرفت که با استفاده از این روش امکان تخلیص سلول‌های بنیادی مزانشیمی با کارایی بالا از مغز استخوان موش نژاد C57B1/6 وجود دارد. سلول‌های CD34+ مغز استخوان موش C57/B16 با توانایی چسبیدن به ظرف کشت پلاستیک و تمایز به دودمان‌های اسکلتی،‌ سلول‌های بنیادی مزانشیمی می‌باشند.   کلمات کلیدی : سلول‌های بنیادی مزانشیمی، مغز استخوان، آنتی‌ژن CD34